[文章導(dǎo)讀] （切片機(jī)）教學(xué)中，光鏡下觀察切片標(biāo)本多數(shù)是石蠟切片法制備的?；畹募?xì)胞或組織多為無(wú)色透明，各種組織間和細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出；組織離開機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組織腐敗，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡，而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。

石蠟切片不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。（切片機(jī)）（點(diǎn)擊了解詳情）教學(xué)中，光鏡下觀察切片標(biāo)本多數(shù)是石蠟切片法制備的?；畹募?xì)胞或組織多為無(wú)色透明，各種組織間和細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出；組織離開機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組織腐敗，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡，而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。（切片機(jī)）

組織制片技術(shù)與免疫學(xué)技術(shù)結(jié)合構(gòu)成免疫組織（細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)，利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理，檢測(cè)組織切片中細(xì)胞組織的多肽及蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的定性和定位觀察研究。不論哪種免疫組織化學(xué)技術(shù)都包括抗體的制備、組織材料處理、制備玻片標(biāo)本以及免疫染色。冰凍切片手續(xù)簡(jiǎn)便，制片過(guò)程中抗原活性丟失少，但組織細(xì)胞形態(tài)較差；石蠟切片步驟繁多，制片中抗原活性有所減低，但組織細(xì)胞形態(tài)清晰，是免疫組織化學(xué)常規(guī)制備切片方法之一。（切片機(jī)）一般石蠟包埋的組織切片用于檢測(cè)胞漿或核內(nèi)的抗原，不宜做表面抗原染色，有人將新鮮組織浸泡于冷磷酸緩沖液內(nèi)48小時(shí)，再固定于96%乙醇或其他固定液固定的組織切片，可用于表面抗原染色。乙醇、丙酮等固定劑對(duì)抗原破壞較輕，但結(jié)構(gòu)保存較差。最常用的固定液有中性和緩沖福爾馬林，它可與蛋白質(zhì)交叉結(jié)合封閉抗原，在進(jìn)行免疫染色前，切片再用蛋白酶消化，以暴露抗原部位、增強(qiáng)抗原的反應(yīng)。在石蠟切片上進(jìn)行的常用的免疫組化染色有免疫酶組織化學(xué)技術(shù)中的PAP法（非標(biāo)記過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶法）及親和免疫組織化學(xué)技術(shù)中的ABC法（抗生物素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物技術(shù)），其特異性強(qiáng)、敏感性高。（切片機(jī)）使用兩種染色法的組織切片都需先經(jīng)第一抗體（各種抗血清）孵育；再經(jīng)第二抗體或生物素標(biāo)記的第二抗體孵育；后經(jīng)PAP復(fù)和物或ABC復(fù)合物孵育，最后以DAB（二氨基聯(lián)苯胺）-H2O2液顯色呈棕黃色沉淀。（切片機(jī)）常規(guī)復(fù)染、脫水、透明、封片成永久性玻片標(biāo)本，光鏡下檢測(cè)常規(guī)或特殊染色法難以顯示的成分及其精確定位，可用于基礎(chǔ)研究及臨床病理研究及診斷。（切片機(jī)）微波用于石蠟包埋切片免疫組織化學(xué)染色既簡(jiǎn)化步驟又節(jié)省時(shí)間，且能促進(jìn)免疫染色效果。

石蠟包埋組織流式細(xì)胞儀DNA含量分析 是石蠟包埋組織切片與流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，FCM）結(jié)合使用來(lái)測(cè)量DNA含量及倍體分析，這一結(jié)合是流式細(xì)胞儀在臨床應(yīng)用中，特別是在腫瘤研究方面開拓了新的研究途徑。（切片機(jī)）FCM是激光、電子和電子計(jì)算機(jī)、流體噴射技術(shù)的綜合發(fā)展應(yīng)用，是快速定量分析細(xì)胞的技術(shù)，要求被檢細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)。目前已可測(cè)量細(xì)胞的大小、體積、DNA含量、DNA合成速率、RNA含量、表面抗原、染色體等。（切片機(jī)）由于制備樣品技術(shù)的原因，過(guò)去許多流式分析資料僅限于采用新鮮組織標(biāo)本，Hedley等1983年首先報(bào)導(dǎo)了FCM分析石蠟包埋組織切片制備分散細(xì)胞懸液技術(shù)來(lái)進(jìn)行DNA含量的檢測(cè)，從組織切片中能獲得足夠數(shù)量的單個(gè)細(xì)胞，且與新鮮組織分離獲得的單個(gè)細(xì)胞在形態(tài)及DNA含量組方圖上均極為相似。（切片機(jī)）目前國(guó)內(nèi)也在逐步開展這方面的研究。由于這種方法取材可在病理組織觀察或診斷基礎(chǔ)上進(jìn)行，比活檢或手術(shù)切除標(biāo)本更為準(zhǔn)確，又可做回顧性研究分析；且對(duì)DNA檢測(cè)速度快、數(shù)據(jù)客觀可靠，在腫瘤診斷、預(yù)后的預(yù)測(cè)和治療反應(yīng)上具有重要價(jià)值；利用過(guò)去的標(biāo)本可成批制作細(xì)胞懸液、成批上機(jī)測(cè)試，避免了儀器調(diào)試狀態(tài)不同帶來(lái)的影響，石蠟包埋塊保存時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)結(jié)果影響不大。（切片機(jī)）

常規(guī)固定（多數(shù)用福爾馬林）、石蠟包埋的組織塊均可用于流式細(xì)胞術(shù)，但含苦味酸或汞的固定液均不宜使用。切片厚度以30～50微米為宜。切片脫蠟要干凈、徹底，否則制備出的細(xì)胞懸液中碎片多，影響測(cè)定。（切片機(jī)）梯度酒精水化后用胃蛋白酶或胰蛋白酶消化，消化后鏡檢呈單個(gè)分散狀態(tài)；由于福爾馬林固定可使DNA和核蛋白產(chǎn)生共價(jià)交聯(lián)，影響DNA和染料的化學(xué)定量結(jié)合，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降，蛋白酶可破壞其聯(lián)結(jié)，改善測(cè)定的組方圖質(zhì)量，消化時(shí)間以能分散細(xì)胞及細(xì)胞碎片盡量少為適度，以100目尼龍篩網(wǎng)濾去未消化完的組織片，離心去上清液后，加入冰冷的70%酒精固定，放入4℃冰箱備用。（切片機(jī)）上機(jī)前染色。DNA特異熒光染料主要有：（1）碘化丙錠（PI）；（2）溴化乙錠（EB）；（3） 4，6-二脒基-二苯基吲哚（DAPI）。FCM檢測(cè)石蠟包埋組織細(xì)胞DNA含量可做為以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，多參數(shù)綜合診斷中的一個(gè)重要的新手段。（切片機(jī)）由于儀器設(shè)備價(jià)格昂貴及制備樣品的諸多環(huán)節(jié)均可能影響測(cè)定的數(shù)據(jù)，限制了臨床的廣泛使用。

石蠟切片標(biāo)本是形態(tài)計(jì)量技術(shù)的基礎(chǔ) 形態(tài)計(jì)量技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的一種新的定量檢測(cè)技術(shù)，用全自動(dòng)圖像分析儀對(duì)組織和細(xì)胞內(nèi)各種有形成分的數(shù)量、體積、長(zhǎng)度及表面積等的圖像數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)處理，以便對(duì)生物組織細(xì)胞及其結(jié)構(gòu)成分的形態(tài)進(jìn)行定量分析，如線粒體個(gè)數(shù)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞核及胞質(zhì)面積、胰島的數(shù)量及各類細(xì)胞的數(shù)值、腎小體的數(shù)量和體積比以及Feulgen染色測(cè)定細(xì)胞核DNA原位定量等，使組織學(xué)及細(xì)胞學(xué)的研究由形態(tài)及定性觀察轉(zhuǎn)向形態(tài)定量化。形態(tài)計(jì)量是從石蠟組織切片或涂片以及組織的光鏡照片和電鏡照片上的各種結(jié)構(gòu)獲取二維圖像數(shù)據(jù)，通過(guò)軟件程序處理，得出有價(jià)值的結(jié)構(gòu)參數(shù)。（切片機(jī)）這種數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、客觀性強(qiáng)、重復(fù)性好、可減少或彌補(bǔ)觀察者的主觀性差異。形態(tài)計(jì)量已應(yīng)用于臨床病理診斷工作，包括非腫瘤病變與腫瘤病變。（切片機(jī)）國(guó)內(nèi)對(duì)非腫瘤性病變的研究已涉及到動(dòng)脈粥樣硬化、肝硬變、前列腺肥大、克汀病、胰腺炎及精索靜脈曲張等；而對(duì)腫瘤病變的研究則是形態(tài)計(jì)量學(xué)在臨床研究的重點(diǎn)，目前較集中于消化道、肝、膀胱、乳腺和肺等器官的腫瘤。（切片機(jī)）此外，在疾病的發(fā)生過(guò)程中把形態(tài)計(jì)量參數(shù)與功能變化指標(biāo)有機(jī)地結(jié)合，有利于探討疾病的發(fā)病機(jī)制；形態(tài)計(jì)量參數(shù)對(duì)腫瘤病變的治療效果及預(yù)后判斷的估計(jì)亦有參考價(jià)值。

在形態(tài)計(jì)量學(xué)的研究中，首先是對(duì)樣品質(zhì)量要求較高，例如制片過(guò)程中組織的收縮、膨脹與擠壓、切片厚度與方向，特別是切片染色技術(shù)，染色是使組織或細(xì)胞各成分能染成不同色澤而便于識(shí)別，提高待測(cè)成分圖像的可測(cè)性及其內(nèi)在組分的表達(dá)性，使待測(cè)成分的色彩和亮度明顯清晰地區(qū)別于它的背景。（切片機(jī)）采用常規(guī)染色、特殊染色以及免疫組織化學(xué)染色，可對(duì)不同著色的成分及反應(yīng)物作形態(tài)定量測(cè)定；利用免疫組織化學(xué)和原位雜交技術(shù)使病灶染色，再作形態(tài)定量測(cè)量。（切片機(jī)）其次是要找出特征結(jié)構(gòu)參數(shù)或定量指標(biāo)，可先檢測(cè)組織或細(xì)胞的各種可測(cè)參數(shù)或根據(jù)待測(cè)成分的形態(tài)特點(diǎn)設(shè)計(jì)一些參數(shù)，再用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選出有用的參數(shù)作定量測(cè)定。（切片機(jī)）由于儀器昂貴，目前國(guó)內(nèi)尚處在實(shí)驗(yàn)研究階段，臨床上的廣泛應(yīng)用尚有一定困難。形態(tài)計(jì)量技術(shù)與常規(guī)技術(shù)和其它新技術(shù)綜合研究方法的使用，具有較好的應(yīng)用價(jià)值及效果。

隨著各種新儀器的問(wèn)世和新技術(shù)方法的不斷建立與使用，石蠟切片技術(shù)也逐漸擴(kuò)展、滲入許多新領(lǐng)域中，做為基礎(chǔ)技術(shù)提供有效的實(shí)驗(yàn)或使用樣品。石蠟包埋組織切片還可用于細(xì)胞原位核酸分子雜交技術(shù)中，可對(duì)材料中被雜交的DNA分子進(jìn)行定位、含量分析或觀察基因表達(dá)（mRNA）水平；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)可用于固定、石蠟包埋組織的DNA分析，使研究進(jìn)入了分子水平，但在短期內(nèi)這些技術(shù)尚不能做常規(guī)使用。（切片機(jī)）

Micro Tec-旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)4050/4055/4060系列的設(shè)計(jì)為模塊化系統(tǒng)。無(wú)論刀夾或樣品夾都有合理的適配系統(tǒng)和不同的附件，這使得CUT4050、CUT4055和CUT4060的使用異常簡(jiǎn)單，可快速更換刀具與樣品夾。（切片機(jī)）

Pmicro Tec-全自動(dòng)旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)4060E的設(shè)計(jì)為模塊化系統(tǒng)，根據(jù)class4/MedGV標(biāo)準(zhǔn)制造。無(wú)論刀夾或樣品夾都有合理的適配系統(tǒng)和不同的附件，可快速更換刀具與樣品夾，單手可進(jìn)行定位，使用非常簡(jiǎn)單。

根據(jù)class4/MedGV標(biāo)準(zhǔn)制造，科研以及生物、醫(yī)藥或工業(yè)日常工作最佳的選擇，覆蓋刀鋒全長(zhǎng)的保護(hù)裝置以及粗調(diào)行程范圍內(nèi)的滑動(dòng)離合器反鎖定系統(tǒng)，確保使用安全，整個(gè)行程范圍內(nèi)的石蠟或塑膠疊層板都有極高的精度。（切片機(jī)）模塊化系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)：先進(jìn)的配件，設(shè)計(jì)使得試樣更換異常簡(jiǎn)單，刀具可以移動(dòng)，角度可以調(diào)節(jié)，同時(shí)保留基本的調(diào)節(jié)操作，通過(guò)在使用時(shí)鎖定刀具護(hù)罩，有效避免了受傷的風(fēng)險(xiǎn)，切片機(jī)的鎖定裝置恰當(dāng)?shù)丶稍谑州喞铩?/span>

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